培養基：Eosin Methylene Blue Agar（EMB）（一）
發布時間：
2025-06-05
伊紅美藍瓊脂（EMB 瓊脂）又稱曙紅亞甲藍瓊脂，是一種鑒別微生物培養基，可抑制革蘭氏陽性菌的生長，并利用顏色指示劑區分乳糖發酵菌（如大腸桿菌）和非發酵菌（如沙門氏菌和志賀氏菌）。該培養基廣泛用于臨床腸道病原菌分離、水質和食品糞便污染檢測（如大腸埃希氏菌指示污染）。從事 EMB 培養基相關工作的人員常提出以下問題：
伊紅（紅色）、亞甲藍（藍色）及其混合液均非綠色，綠色光澤從何而來？
為何有些糖發酵菌會產生綠色光澤，而另一些則不會？
有時在培養基中觀察到藍色菌落，原因是什么？
帶著這些疑問我們先來看看EMB的原理：
選擇性：抑制革蘭氏陽性菌
作用成分：亞甲藍和伊紅通過破壞細胞膜通透性，抑制葡萄球菌、鏈球菌等革蘭氏陽性菌生長。
鑒別性：基于乳糖發酵的 pH 染色
核心邏輯：細菌發酵乳糖產酸→pH 下降→染料顯色差異。
關鍵 pH 閾值：
? pH<4.9：伊紅與亞甲藍形成紫色復合物，呈現綠色金屬光澤（如大腸桿菌，pH 4.81）。
? pH 4.9-6.0：僅伊紅著色，菌落呈粉 / 紅色（如產氣腸桿菌，pH 5.34）。
? pH>7.0：亞甲藍著色，菌落無色或淺色（如沙門氏菌，pH 8.24）。
敲重點：
綠色金屬光澤源于伊紅與亞甲藍在 pH<4.9 時通過離子鍵和氫鍵形成的大分子復合物，該復合物在菌落表面形成微小晶體顆粒，經光線漫反射和干涉呈現金屬光澤，而非簡單顏色混合（如大腸埃希氏菌劇烈發酵乳糖產酸觸發此過程）。
產酸量不足：弱乳糖發酵菌（如肺炎克雷伯菌）產酸較少，pH 通常維持在 5.0-6.0，僅能使伊紅 Y 單獨著色，形成粉紅色或紅色菌落，因無法觸發伊紅與亞甲藍復合物的形成，故不能產生綠色金屬光澤。
蔗糖發酵的干擾：部分腸桿菌（如產氣腸桿菌）同時發酵蔗糖和乳糖，產酸路徑復雜，可能導致 pH 波動，難以穩定降至 4.9 以下，從而無法產生綠色金屬光澤。
染料比例影響：若培養基中伊紅 與亞甲藍比例失衡（如 > 6:1），即使 pH 符合要求，過量伊紅會掩蓋復合物的綠色，使菌落顏色偏紅，無法產生綠色金屬光澤。
培養基中出現藍色菌落的可能原因：
非乳糖發酵菌的特征性表現
沙門氏菌、志賀氏菌、變形桿菌等非乳糖發酵菌無法分解乳糖，培養基 pH 維持中性（7.0）或因蛋白質代謝呈堿性（pH>7.0）。此時亞甲藍（堿性染料）占主導，被細菌吸附后形成藍色或藍紫色菌落（伊紅 Y 在堿性條件下著色能力弱）。
細菌非糖代謝產堿
部分革蘭氏陰性菌（如假單胞菌、產堿桿菌）通過分解蛋白胨產生氨（NH?）等堿性物質，導致 pH 升高。典型表現為菌落本身呈深藍色，且周圍培養基因堿性增強出現藍色暈圈。
培養基配制或儲存不當
初始 pH 偏高（>7.5）或亞甲藍濃度異常（如比例失衡）；
瓊脂干燥或儲存污染，均可能導致菌落呈現藍紫色。
小結：
EMB 瓊脂的綠色光澤本質是細菌代謝、染料化學與光學物理共同作用的結果，是微生物學中 “表型 - 代謝 - 環境” 關聯的經典案例。綠色光澤的三大要素：
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